实验十五　天然水中细菌总数的检验方法

一、原理

每种细菌都有它一定的生理特征，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH值、需氧性质等）去满足其要求，才能将各种细菌培养出来。但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法（在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养）去测定细菌菌落总数，因此，所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧及兼性厌氧的细菌菌落总数。

二、培养基和试剂

营养琼脂

（1）成分　蛋白胨10g

牛肉膏3g

氯化钠5g

琼脂15

蒸馏水1000mL

（2）制法　将上述成分混合后，加热溶解，调pH值为7.4～7.6，分装，121℃ 20min灭菌。储存于冷暗处备用。

三、仪器

①高压蒸汽灭菌器。

②干热灭菌箱。

③培养箱：（36±1）℃。

④冰箱。

⑤电炉。

⑥天平。

⑦放大镜。

⑧灭菌平皿：直径9cm。

⑨灭菌刻度吸管。

⑩灭菌采样瓶。

锥形瓶。

pH计或精密pH试纸。

四、分析步骤

①以无菌操作方法，用1mL灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中。加取1mL注入另一灭菌平皿中作平行接种。

②将已熔化并冷至46℃左右的营养琼脂培养基注入平皿，每皿约15mL，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。同时另将营养琼脂培养基倾入灭菌的空平皿内作对照。

③待琼脂凝固后，翻转平皿，使皿底在上，置于（36±1）℃培养箱培养24h。取出，计数每个平皿内的菌落数目。

五、菌落计数及报告方法

作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，求出同一水样两平皿的平均菌落数。在求平均数中，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该样品的菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可将此半个平皿计数后乘2以代表全平皿菌落数。同一样水样两平皿的平均菌落数，即为该水样1mL中的细菌菌落总数。

六、附注

①细菌总数是指1mL水样在一定条件培养后，所生长的细菌菌落的总数。

②细菌总数主要作为判定水被污染程度的标志，但不能说明污染的来源。因此，必须结合大肠菌群数来判断水的污染来源和安全程度。

③本方法规定用标准平皿计数法测定饮用天然矿泉水中的细菌总数。